MPB：南京?湖泊所王建军组-?溪流底栖附着生物膜的野外采集方法

图1.手持GPS定位，采样人员1在水中开展工作

采样人员2在溪流边，带好无菌手套，开始生物膜的刮取工作。首先使用50 ml瓶装取原位水两瓶 (图2 A-B)。然后在拿到石头之后，选取石头表面较光滑的区域4 cm²左右，如果石头表面有泥沙，首先将石头放到溪流中去进行冲刷，切记不可用手清洗，会破坏石头表面的生物膜。之后使用镊子从无菌袋中镊取无菌海绵一块，对于选定的区域进行生物膜刮取 (图2 C)。刮完之后的生物膜会被吸附到海绵中，将海绵放到20 ml采样瓶中，通过镊子挤压，将刮取的生物膜挤到采样瓶中。然后进行第二块石头的刮取，重复上述操作。刮取的生物膜收集到同一个采样瓶中，此处10块石头上采集到的生物膜，最后汇总收集到同一个采样瓶中 (图2 D)。刮完10块石头之后，海绵块在溪流中蘸取一点原位水，挤压到采样瓶中，将海绵中剩余的生物膜洗到采样瓶中，收集海绵中残留生物膜，此处需要注意，所有的10块石头尽量使用同一块海绵进行刮取，采集完生物膜之后，所使用的海绵不留存，装入垃圾袋中带走。之后收起采样工具和所采集的样品，将装有原位水和生物膜的采样瓶装到一个保鲜袋中，立即放入车载冰箱中进行冷冻。

图3.现场记录环境数据及四周环境拍照

四、样品的保存及运输

每天结束采样工作之后，要对所采集到的样品进行及时冷冻。全部采样工作结束之后，在当地市场购买泡沫保温箱，将冷冻样品和提前冻好的冰袋装入保温箱中，这样可以减小样品的融化速度，尽量避免冷冻样品的反复冻融。然后通过快递点邮寄或者飞机、火车随行托运，将样品带回实验室。在实验室中立即进行样品的冷冻，直到后期对样品的进一步分析。

现场实验数据通过excel表格整理为电子版，在个人电脑中进行保存，并且进行现场照片的分类和保存。

参考文献

1.Wang, J., S. Meier, J. Soininen, E. O. Casamayor, F. Pan, X. Tang, X. Yang, Y. Zhang, Q. Wu, J. Zhou, and J. Shen. 2017. Regional and global elevational patterns of microbial species richness and evenness. Ecography. 40:393-402.

2.Wang, J., J. Soininen, Y. Zhang, B. Wang, X. Yang, and J. Shen. 2011. Contrasting patterns in elevational diversity between microorganisms and macroorganisms. Journal of Biogeography. 38:595-603.

3.Félix Picazo, Vilmi, A., Aalto, J., Soininen, J., & Wang, J. 2020. Climate mediates continental scale patterns of stream microbial functional diversity. Microbiome. 8(92):1-14.

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来源：刘永鑫Adam