图1，四鞭毛细胞，1-4表示四鞭毛
2. 将杂交后的细胞点到TAP (3%) 固体培养基中，每个培养皿点1-2 ml细胞，超净台中吹2-3 h至吹干，使用封口膜封口后，50-70 μmol·photons·m-2·s-1光照培养过夜后，再黑暗培养5-7 d至合子细胞成熟。
四、遗传连锁分析
1. 随机单克隆分析 (Random spore)
1.1将手术刀在95%酒精中清洗干净后，在酒精灯外焰处烧5-10 s，倒置在管架上备用；
1.2黑暗6 d合子细胞成熟后，在超净台中打开培养皿，使用手术刀，快速并适当用力地刮开表面的营养细胞层；
1.3将开盖的培养皿移至体视镜下，放大至50倍，观察刮开营养细胞的区域是否有合子细胞，合子细胞在体视镜下呈圆形气泡状，具有明显的黑色外圈和透明的中心，并且大于营养细胞，当杂交效率高时，能够观察到聚集到一起的合子细胞 (见图2) ；
2.7图3. 氯仿清除营养细胞（红圈内表示含有合子的胶块）
2.8处理后的胶块移至TAP固体培养基横线最左端的上方，并拖动胶块平行于横线向右拖动；
2.9体视镜下找到胶块位置聚焦，并在胶块移动路线上找到合子细胞较多的位置，使用玻璃针尖端的圆头轻轻按压合子细胞附近的培养基，至培养基表面渗出水珠，用玻璃针拖动合子细胞附近的的水珠，从而使合子细胞跟随水珠移动 (此处应避免直接用玻璃针针尖戳动合子细胞) ；
2.10使用玻璃针将合子细胞排列在就第二条横线与每条竖线的交界处，使用封口膜将培养基封口后，于光照培养箱中培养12 h (可根据合子细胞萌发情况适当调整时间) 至合子细胞萌发；
2.11合子细胞萌发后，在超净台中使用95%酒精处理玻璃针后，将培养皿打开，放置于体视镜下，在第二条横线与竖线交叉处观察合子细胞状态，萌发后的合子细胞会变大，在体视镜下可观察到一个大的合子细胞或者四个细胞聚集的形态，使用玻璃针将合子细胞轻轻戳破后，可观察到4个子细胞和一个不规则的合子细胞壁，如果无法区分合子细胞壁与细胞，可将4个细胞和合子细胞壁依次排列在第2-6条横线与竖线的交叉处；
2.12可按照从左到右的顺序依次分每个合子细胞，分下一个合子细胞时，不需要换玻璃针，但需要将玻璃针在空白处轻轻拖动，防止有细胞粘在玻璃针针头上；
2.13分完所有合子细胞后，使用封口膜将培养皿封口后，于光照培养箱中培养3-4 d，将有完整四个细胞的四分体 (见图4) 划到新的TAP固体培养基上活化，并进行基因型和交配型鉴定；
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来源：刘永鑫Adam
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