MPB：山大倪金凤组-黄翅大白蚁肠道放线菌的分离与培养

图.1 基于16S rRNA 序列的系统发育树分析（邻位法）
Figure 1. Neighbour-joining phylogenetic tree of 13 Actinomycetes based on 16S rRNA genes

注意事项

1.采集到的白蚁材料尽量在新鲜状态下立即解剖，以保证肠道放线菌的分离效果;

2.在解剖白蚁前，清洗消毒白蚁体表，以防止体外菌的污染；

3.解剖过程中先将白蚁头部去掉，按住白蚁用解剖针从尾部缓缓拉出肠道，可以保持肠道的完整性。

溶液配方

1.PBS缓冲液：NaCl 4 g，KCl 0.1 g，Na₂HPO₄ 0.72 g，NaH₂PO₄ 0.12 g，加蒸馏水500 ml，pH 7.4。

2.高氏一号培养基（g/L）：可溶性淀粉20 g，KNO₃ 1 g，K₂HPO₄H₂O 0.5 g，MgSO₄H₂O 0.5 g，NaCl 0.5 g，FeSO₄H₂O 0.01 g，琼脂18 g，加蒸馏水定容至1 L。

3.可溶性淀粉培养基（g/L）：可溶性淀粉10 g，K₂HPO₄ 1 g，MgSO₄ 1 g，NaCl 1 g，(NH4)₂SO₄ 2 g，CaCO₃ 2 g，微量盐溶液1 ml，加蒸馏水定容至1 L，pH 7.2。

4.1000×微量盐溶液（g/L）：MnCl₂H₂O 0.1 g, FeSO₄H₂O 0.1 g, ZnSO₄H₂O 0.1 g，加蒸馏水定容至1 L。

5.麸皮培养基（/L）：100 g 麸皮加入适量水，沸水煮30 min，经纱布去除沉淀后，加蒸馏水定容至1 L。

6.LB 培养基（g/L）：NaCl 10 g，胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，琼脂15 g，加蒸馏水定容至1 L，液体培养基不加琼脂粉。

参考文献

1.Aanen, D. K. and Eggleton, P. (2005). Fungus-growing termites originated in African rain forest. Curr Biol 15(9): 851-855.

2.Hager, F. A. and Kirchner, W. H. (2013). Vibrational long-distance communication in the termites Macrotermes natalensis and Odontotermes sp. J Exp Biol 216(Pt 17): 3249-3256.

3.Ramadhar, T. R., Beemelmanns, C., Currie, C. R. and Clardy, J. (2014). Bacterial symbionts in agricultural systems provide a strategic source for antibiotic discovery. J Antibiot (Tokyo) 67(1): 53-58.

4.未建华和李净净. (2019). 培菌昆虫相关放线菌的次级代谢产物研究进展. 微生物学报 59(10): 1864-1871.

5.徐晓, 孙飞飞, 尹彩萍，王滢和张应烙 (2018). 昆虫共生菌的次级代谢产物研究进展. 微生物学报 58(6): 1126-1140.

6.Wu, Y., Chi, S., Yun, C., Shen, Y., Tokuda, G. and Ni, J. (2012). Molecular cloning and characterization of an endogenous digestive beta-glucosidase from the midgut of the fungus-growing termite Macrotermes barneyi. Insect Mol Biol 21(6): 604-614.

致谢

本项目获得国家重点基础研究发展计划 (973计划，号：2011CB707402)，国家自然科学基金 (编号：31970119, 31272370, 30870085) 及山东大学微生物技术国家重点实验室自主设置课题的支持。

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来源：刘永鑫Adam