2016—2019年云南省临沧市中缅边境牛口蹄疫血清学检测

摘要：为了解云南省中缅边境地区牛口蹄疫免疫状况，评估疫情发生风险，对2016—2019年采自临沧市镇康、耿马和沧源3个县168个场点的入境牛和境内牛血清1688份，采用口蹄疫病毒O、A、Asia-1型C-ELISA抗体检测试剂盒与口蹄疫病毒非结构蛋白抗体单抗阻断ELISA试剂盒进行检测。结果显示：O、A、Asia-1型抗体阳性率分别为39.99%、39.22%、28.85%，非结构蛋白抗体阳性率为20.44%。与沧源县和耿马县相比，镇康县O、A、Asia-1型抗体阳性率和非结构蛋白抗体阳性率显著偏低（P＜0.01）。2016—2019年，O、A型抗体阳性率总体呈显著上升趋势（P＜0.05），Asia-1型呈下降趋势，非结构蛋白抗体呈现波浪状变化。境内牛O、A、Asia-1型抗体阳性率显著高于入境牛（P＜0.05），而非结构蛋白抗体阳性率显著低于入境牛（P＜0.01）；水牛O、A、Asia-1型抗体阳性率和非结构蛋白抗体阳性率均高于黄牛。结果表明，云南省临沧市中缅边境地区入境牛口蹄疫免疫水平较低，且隐性带毒率较高，存在较高的病毒传入和疫情发生风险。提议在中缅边境地区持续开展牛口蹄疫病原学和血清学监测，提高边境地区易感动物免疫密度，严格监控牛的非法跨境移动。本研究为中缅边境地区牛口蹄疫防控提供了数据参考。

口蹄疫（foot-and-mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）引起的，主要侵害猪、牛、羊等偶蹄动物的一种高度接触性传染病。世界动物卫生组织（OIE）将其列为须通报动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。FMDV有7个血清型，型间无交叉免疫保护。在东南亚国家，流行的FMDV毒株主要有O型的SEA/Mya-98、Cathay、ME-SA/PanAsia、ME-SA/Ind-2001d毒株以及A型的ASIA/Sea-97毒株。其中ME-SA/Ind-2001d毒株2015年首次传入老挝，随后在越南、缅甸流行，2017年初传入我国新疆喀什地区。Asia-1型流行的报告极少，近15年来，只有2017年缅甸报道过G-VIII毒株。与我国接壤或邻近的东南亚国家A、O和Asia-1型FMD常年流行，动物隐性带毒情况较普遍。从分子流行病学分析结果来看，近年引起我国FMD疫情的流行毒株均来源于东南亚国家，因此东南亚地区已成为传入我国FMDV的主要疫源地。

临沧市地处云南省西南部，辖1个区7个县，其中镇康、耿马和沧源3个县与缅甸山水相连，国境线长290.8km（镇康县段96.36km、耿马县段47.35km与缅甸禅邦第一特区果敢县接壤，沧源县段147.09km与缅甸佤邦第二特区接壤），有镇康南伞、耿马孟定清水河以及沧源永和3个国家级口岸和数量众多的边境通道，边民互通频繁，畜牧业生产长期处于频繁互市与混牧状态。因东南亚、南亚大多数国家存在FMD，国与国之间的正常活畜流动和畜产品正常贸易被严格禁止。但因国内牛羊肉供需矛盾突出，价格逐年上涨，使得边民跨境非法贩运活畜入境行为频繁发生。加之，缅北地区战事时有发生，大量牲畜随边民不断涌入临沧境内，造成大量活畜非法频繁跨境流动，给临沧市动物疫病防控带来极大挑战。为了解临沧市边境地区外来牛FMD血清学背景，对2016—2019年采自镇康、耿马和沧源3个县的入境牛血清1688份进行了FMDV血清抗体检测，并对检测结果进行统计分析，以评估当地入境牛FMDV血清抗体水平和传入的潜在风险。

材料与方法

材料

血清采集。按照随机抽样原则，在云南省临沧市镇康、耿马和沧源3个县中缅边境采样。每个县先按采样点所属地理位置划定采样区域，再将划定区域内的养殖场、活畜交易市场和散养户分别进行编号，并随机抽取养殖场2~3个、活畜交易市场1个、散养户40~60个。样品采集由县级动物疫病预防控制中心负责实施，场群内按饲养牛只的耳标号，随机选取采样个体。2016—2019年，3个县共在168个采样点，累计采集牛血样品1688份（表1）。将采集的血液样品分离血清，56℃灭活30min，-20℃保存备用。

检测方法

血清抗体检测。采用 O、A、Asia-1型C-ELISA抗体检测试剂盒进行抗体检测，各型试剂盒的操作方法相同，均参照说明书进行。结果判定：当阳性对照孔平均OD值≥0.8，阴性对照孔平均OD值≤0.3时，试验结果成立；抑制率≥40%判定为阳性，抑制率＜40%判定为阴性。

非结构蛋白抗体检测。采用FMDV非结构蛋白抗体单抗阻断ELISA试剂盒，按照试剂盒说明书操作。结果判定：阻断率=（阴性对照OD450平均值-样品孔OD450平均值）/阴性对照OD450平均值×100%。当阳性对照OD450平均值≥55%、阴性对照OD450平均值-阳性对照OD450平均值≥0.6时，试验结果成立；被检样品阻断率≥40%判定为阳性，介于25%~40%判定为可疑，＜40%判定为阴性。

检测结果分析

从血清型分布、时间分布、区域分布和群间分布等方面，应用SPSS软件进行抗体阳性率统计分析。

结果与分析

血清型分布

血清型统计数据（表2）显示：1688份血清样品中，共检出O型抗体阳性675份，抗体阳性率为39.99%；A型抗体阳性662份，抗体阳性率为39.22%；Asia-1型抗体阳性487份，抗体阳性率为28.85%。非结构蛋白抗体阳性345份，抗体阳性率为20.44%。

区域分布

区域统计结果（表3）显示：沧源县采集血清样品558份，O、A、Asia-1型抗体阳性率分别为49.28%、56.27%、43.19%，非结构蛋白抗体阳性率为24.91%；耿马县采集血清样品560份，O、A、Asia-1型抗体阳性率分别为48.39%、44.64%、32.32%，非结构蛋白抗体阳性率为17.68；镇康县采集血清样品570份，O、A、Asia-1型抗体阳性率分别为22.63%、17.19%、11.40%，非结构蛋白抗体阳性率为18.77%。总体来看，沧源县和耿马县抗体阳性率相当，但镇康县显著偏低（P＜0.01）。

时间分布

时间分布统计结果（表4）显示：2016—2019年3个边境县的O、A型抗体阳性率总体呈显著上升趋势（P＜0.05），均由2016年的15%左右上升到2019年的40%以上；Asia-1型抗体阳性率呈下降趋势，由2016年的33%左右下降到2019年的25%左右；非结构蛋白抗体阳性率呈现波浪状变化趋势，2017年降至7.56%，2018年又上升至37.05%，2019年再次下降到17.00%。

群间分布

境内牛和入境牛。累计检测的1688份牛血清样品包括入境牛血清样品1238份、境内牛450份。统计结果（表5）显示：境内牛O、A、Asia-1型抗体阳性率分别为44.89%、43.11%、33.33%，入境牛分别为38.21%、37.80%、27.22%，境内牛显著高于入境牛（P＜0.05）；境内牛非结构蛋白抗体阳性率为7.56%，入境牛为25.12%，差异极显著（P＜0.01）。

黄牛与水牛。从入境牛的种属来看，水牛O、A、Asia-1型抗体阳性率分别为63.08%、50.00%、29.20%，非结构蛋白抗体阳性率为26.92%；黄牛O、A、Asia-1型抗体阳性率分别为57.78%、35.93%、23.70%，非结构蛋白抗体阳性率为12.22%。水牛O、A型抗体阳性率以及非结构蛋白抗体阳性率均高于黄牛（表6）。

讨论

从血清学监测结果可以看出，2016—2019年云南省临沧市中缅边境牛FMD免疫水平不高，且存在一定的病毒感染，O、A、Asia-1型和非结构蛋白抗体平均阳性率介于20%~40%。东南亚国家大多经济不发达，部分国家并未实施强制免疫策略，导致FMD免疫率低，而病毒感染率偏高。较高的非结构蛋白抗体水平，说明近期牛感染过病毒或隐性带毒。镇康县和沧源县2018年入境牛非结构蛋白抗体分别高达46.70%和40.00%，隐性带毒风险极高，因此如何控制FMD跨境传播，是今后边境地区FMD防控面临的难题。

检测发现，边境地区牛群中存在一定的Asia-1型抗体阳性（28.85%），而多数东南亚国家多年来未报告发现Asia-1型疫情。这其中除因免疫引起的抗体阳性外，还有两种可能：一是不同血清型的交叉免疫导致cELISA检测出现假阳性；二是Asia-1型FMDV在东南亚部分地区仍呈隐性流行。因此我国要警惕东南亚地区Asia-1型的传入。

2017年O、A型抗体阳性率比2016年均显著上升，但非结构蛋白抗体阳性率显著下降，说明云南省自2017年获批在云南边境实施跨境动物疫病区域化管理试点工作以来，通过建立FMD控制区，指定入境通道，控制偶蹄活畜向控制区外流动等措施，有效阻断了FMD的传播，降低了传入风险。但2018年非结构蛋白抗体阳性率明显上升，这可能与国内肉价上涨以及2018年境外口蹄疫流行加重、地方武装战事等，导致大量活牛非法跨境输入有关。

与入境牛相比，境内牛O、A、Asia-1型抗体阳性率较高，非结构蛋白抗体阳性率较低，说明境内牛口蹄疫免疫效果略优于入境牛，但不管是境内牛还是境外牛，总体血清抗体阳性率偏低，疫情发生风险较高。当然，Asia-1型抗体阳性率偏低也与我国2017年Asia-1型疫苗退出强制免疫计划有关。检测发现，水牛的非结构蛋白抗体阳性率高于黄牛，说明水牛携带FMDV的风险偏高，其原因有待探讨。

本次检测仅采集入境牛样本1238份、境内牛450份，样本数量偏少，也不排除采样时，部分散养户提供信息不准确等因素的存在，这些都会导致检测分析结果有偏倚。下一步可考虑增加境内牛的样本数量，采集有详细背景信息的牛群。

结论

检测发现，云南省临沧市中缅边境地区入境牛FMD免疫水平较低，隐性带毒率较高，存在较高的疫情传入和发生风险。提议在边境地区连续系统开展FMD病原学和血清学监测，加强免疫，提高免疫密度和抗体水平，同时严格监控牛的非法跨境移动，警惕FMD传入。

来源：中国兽医发布